Oshima-Franco, YokoWerner, Adriana CarolinaWerner, Adriana Carolina2023-05-092023-05-092014https://repositorio.uniso.br/handle/uniso/650Inúmeras potencialidades medicinais foram relatadas com extratos oriundos de diversas partes da planta Casearia sylvestris. Estudos prévios demonstraram que extratos tanto aquoso quanto hidroalcoólico de C. sylvestris expressaram significativo efeito facilitatório em modelo nervo frênico-diafragma de camundongos. O benefício clínico na busca de novos agentes facilitadores é amplo. Dependendo da sua farmacodinâmica, sob o parâmetro da junção neuromuscular, pode-se pensar em aplicações nas doenças neuromusculares que causam paralisia, como adjuvantes no tratamento de envenenamentos causados por toxinas, na reversão de bloqueadores neuromusculares, entre outros. Os objetivos deste estudo foram: a) identificar farmacologicamente o efeito facilitatório em frações orgânicas de diferentes polaridades obtidas de folhas de C. sylvestris; b) Analisar músculos resultantes de tratamentos com frações neurofacilitadoras através de microscopia de luz; c) Determinar o efeito da fração facilitadora em relação à colinesterase e creatinoquinase (CK); e, d) investigar a farmacodinâmica da fração neurofacilitadora. As frações de C. sylvestris (hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol) foram ensaiadas em preparações nervo frênico-diafragma (NFD) de camundongos na concentração de 200 μg/mL. Músculos diafragmas tratados com frações identificadas como neurofacilitadoras foram submetidos à microscopia de luz para verificar possível miotoxicidade; e bioquimicamente foi determinada a atividade de CK em preparações biventer cervicis (BC) de pintainho tratadas com a fração metanólica (FM) na concentração de 240 μg/mL.O estudo farmacodinâmico foi realizado utilizando-se ferramentas farmacológicas em preparações estimuladas direta ou indiretamente. Em alguns protocolos foram aplicados estímulos tetanizantes (40 Hz). Experimentos realizados com frações de diferentes polaridades da C. sylvestris, na concentração de 200 µg/mL, mostraram que as frações acetato de etila e metanólica foram as responsáveis pelo efeito de facilitação. A análise histológica comprovou a ausência de danos ao tecido muscular de preparações tratadas com essas frações, em relação ao controle Tyrode. A FM foi selecionada para os ensaios farmacodinâmicos em virtude do maior rendimento obtido. Do estudo farmacodinâmico, com fármacos de atuação em sítios específicos da junção neuromuscular, temos que: em preparações previamente curarizadas, a FM demonstrou atividade antagonista de diferente intensidade, assim como os fármacos neostigmina e 3,4 diaminopiridina (3,4 DAP). A aplicação de estímulo tetanizante (40 Hz) não apresentou a inibição de Wedensky, característica de anticolinesterásicos como a neostigmina. Em 9 preparações previamente tratadas com dantrolene, a FM não apresentou nenhum efeito, excluindo-se a possibilidade de competição com o dantrolene no receptor rianodina. Em preparações estimuladas diretamente, a adição de FM não produziu nenhum efeito sobre o sarcolema. Em preparação BC a FM não alterou as contraturas induzidas pela adição de acetilcolina exógena (ACh) e cloreto de potássio (KCl). Experimentos com nifedipina mostraram que o efeito facilitador da FM pode ser modulado por cálcio extracelular. A participação de receptores pré-juncionais foi excluído pelos resultados obtidos com atropina. A tetrodotoxina antagonizou o efeito facilitador da FM, sendo que o mesmo não ocorreu com 3,4 DAP e neostigmina. Os resultados apresentados mostram que o local de ação da FM ocorre à nível pré-sináptico através da ativação de canais de sódio neuronais, podendo a neurofacilitação ser modulada pelo cálcio extracelular.Several medicinal potentialities were mentioned to extracts from parts of Casearia sylvestris plant. Previous studies showed that either aqueous as hydoralcoholic extracts from C. sylvestris expressed significantly facilitatory effect on mice phrenic nerve-diaphragm model. The clinical benefits in the search of new facilitatory agents are enormous. Depending on of its mechanism of action, under neuromuscular junction, it is possible to apply in neuromuscular diseases that lead to paralysis, as adjuvant in envenomation treatments induced by toxins, in the neuromuscular blockers recovery, among others. The aims of this study were: a) to identify pharmacologically the facilitatory effect in organic fractions of different polarities obtained from C. sylvestris leaves; b) To evaluate muscles resulting from neurofacilitating fractions using light microscopy; c) To evaluate cholinesterase inhibition and creatine kinase activity of neurofacilitating fraction; and, d) to evaluate the mechanism of action of the neurofacilitating fraction. The C. sylvestris fractions (hexane, dichloromethane, ethyl acetate and methanol) were assayed using mice phrenic nerve-diaphragm (PND) preparations at 200 µg/mL. Diaphragm muscles resulting from pharmacological assays that expressed facilitatory effect were submitted to light microscopy in order to verify a possible myotoxicity, and were biochemically evaluated the CK activity from experiments carried out using chick biventer cervicis treated with methanol fraction at 240 µg/mL. The mechanism of action study was carried out using pharmacological tools in isolated preparations (in) directly stimulated. In some protocols, tetanic stimulation (40 Hz) was used. Experiments carried out with C. sylvestris fractions from different polarities at 200 µg/mL showed that ethyl acetate and methanol fractions were responsible by the facilitatory effect. Histological analysis showed the cell damage absence in preparations treated with these fractions, compared to Tyrode control. The methanol fraction was selected for further mechanism of action studies due its major outcome. From this study, using agents that act in specific places of neuromuscular junction, we have: MF act as antagonist of different intensity, in pre curarized preparations, as neostigmine and 3,4 diaminopyridine (3,4 DAP). PND preparation exposed to MF under tetanic stimuli (40 Hz) did not show the Wedensky inhibition, characteristic of cholinesterase inhibitors, as neostigmine. MF did not show any effect in pretreated preparations with dantrolene, excluding competition against dantrolene at ryanodine receptor. MF addition in preparations directly stimulated did not produce any effect on sarcolemmal membrane. In BC preparation, MF fraction did not change the contracture induced by exogenous acetylcholine (ACh) and potassium chloride (KCl). Experiments with nifedipine 11 showed that the facilitatory effect of MF can be modulated by extracellular calcium. The sharing of prejunctional receptors was excluded by obtained results with atropine. Tetrodotoxin antagonized the facilitatory effect of MF, in opposite to 3,4 DAP and neostigmine. The results showed that MF act presynaptically via neuronal sodium channel activation and the neurofaciltion can be modulated by extracellular calcium.Plantas medicinaisFitoquímicosNeurofarmacologiaDissertação