Oliveira, Thais JardimMello, Isabelle TeixeiraMello, Isabelle Teixeira2025-07-032025-07-032025https://repositorio.uniso.br/handle/uniso/2001https://doi.org/10.22482/dspace/460As hidrofobinas são proteínas anfifílicas produzidas por fungos filamentosos, amplamente exploradas por suas propriedades de autoagregação, adesão a superfícies e funcionalização de materiais. Este trabalho teve como objetivo comparar a produção e a extração de hidrofobinas expressas em Aspergillus oryzae, tanto em cepas recombinantes quanto na cepa selvagem RIB40, com foco na recuperação da hidrofobina RolA e da proteína TUB, que possui função semelhante, embora não contenha os resíduos de cisteína conservados típicos das hidrofobinas. As cepas recombinantes foram cultivadas em meio mínimo, com indução da expressão por adição de maltose, enquanto a cepa RIB40 foi utilizada como controle positivo para secreção natural da RolA. A extração da RolA da RIB40 com ácido fórmico foi bemsucedida, permitindo sua detecção por SDS-PAGE e confirmação por espectrometria de massas. Nas cepas recombinantes, a precipitação com sulfato de amônio não permitiu a visualização clara das proteínas, mas a RolA foi detectada diretamente no sobrenadante da cultura no SDS-PAGE e posteriormente purificada com sucesso por cromatografia de afinidade. A TUB também foi visualizada em SDS-PAGE, com massa compatível com sua forma madura (aprox. 17 kDa). Os resultados indicam que ambas as proteínas foram secretadas pelas cepas recombinantes e recuperadas diretamente do meio, dispensando etapas agressivas de extração. Essa característica representa uma vantagem para aplicações industriais, permitindo a simplificação do processo, redução de custos e menor uso de solventes potencialmente tóxicos.Hydrophobins are amphiphilic proteins produced by filamentous fungi, widely explored for their self-aggregation properties, surface adhesion, and material functionalization. This study aimed to compare the production and extraction of hydrophobins expressed by Aspergillus oryzae, using both recombinant strains and the wild-type strain RIB40, focusing on the recovery of the hydrophobin RolA and the TUB protein, which has a similar function despite lacking the conserved cysteine residues typical of hydrophobins. The recombinant strains were cultivated in minimal medium with expression induced by maltose addition, while the RIB40 strain was used as a positive control for the natural secretion of RolA. Extraction of RolA from RIB40 using formic acid was successful, allowing its detection by SDS-PAGE and confirmation by mass spectrometry. In the recombinant strains, ammonium sulfate precipitation did not clearly visualize the proteins, but RolA was detected directly in the culture supernatant by SDS-PAGE and was subsequently purified by affinity chromatography. TUB was also visualized by SDS-PAGE, with a molecular weight consistent with its mature form (aprox. 17 kDa). The results indicate that both proteins were secreted by the recombinant strains and recovered directly from the culture medium, eliminating the need for harsh extraction steps. This feature represents an advantage for industrial applications, as it simplifies the process, reduces costs, and minimizes the use of potentially toxic solvents.Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 BrazilEngenharia de Bioprocessos e Biotecnologia - TCCUniversidade de Sorocaba - TCCMonografia / TCCEngenharias::Engenharia Biomédica