Squina, Fabio MarcioGalvão, Matheus HenriqueGalvão, Matheus Henrique2025-10-142025-10-142025https://repositorio.uniso.br/handle/uniso/2205https://doi.org/10.22482/dspace/543As proteínas anfipáticas produzidas por fungos filamentosos, possuem amplo potencial biotecnológico devido à sua capacidade de interação com superfícies hidrofóbicas. Este estudo teve como objetivo produzir hidrofobinas e proteínas de ligação à superfície hidrofóbica recombinantes homólogas em Aspergillus oryzae, utilizando abordagens integradas de bioinformática, clonagem molecular e edição genômica via CRISPR-Cas9. Foram prospectadas sequências de hidrofobinas em bancos de dados públicos (UniProt, Pfam, InterPro) e desenvolvidas ferramentas computacionais (SSN, CPHunter) para identificar padrões estruturais, como cysteine loops. Quatro candidatas foram selecionadas: RoIA, H2, H3 (classe I) e TUB (potencial classe III). As sequências foram amplificadas por PCR, clonadas em E. coli e integradas no genoma de A. oryzae, utilizando um cassete de expressão com promotor pglaA e sistema de seleção uidA/ pyrGΔ. A expressão das proteínas foi confirmada por SDS-PAGE, com secreção eficiente de RoIA (16 kDa) e TUB (20 kDa). A ferramenta CPHunter demonstrou alta acurácia na identificação de hidrofobinas, revelando novas candidatas estruturais para projetos futuros. Os resultados destacam a viabilidade de A. oryzae como biofábrica para produção de hidrofobinas, com aplicações em biotecnologia industrial.The amphipathic proteins produced by filamentous fungi have significant biotechnological potential due to their ability to interact with hydrophobic surfaces. This study aimed to produce recombinant homologous hydrophobins and hydrophobic surface-binding proteins in Aspergillus oryzae, using integrated approaches involving bioinformatics, molecular cloning, and genome editing via CRISPR-Cas9. Hydrophobin sequences were mined from public databases (UniProt, Pfam, InterPro), and computational tools (SSN, CPHunter) were developed to identify structural patterns such as cysteine loops. Four candidates were selected: RoIA, H2, H3 (class I), and TUB (potential class III). The sequences were amplified by PCR, cloned in E. coli, and integrated into the genome of A. oryzae using an expression cassette with the pglaA promoter and selection system uidA/ pyrGΔ. Protein expression was confirmed by SDS-PAGE, with efficient secretion of RoIA (16 kDa) and TUB (20 kDa). The CPHunter tool demonstrated high accuracy in hydrophobin identification, revealing new structural candidates for future projects. The results highlight the feasibility of A. oryzae as a biofactory for hydrophobin production, with applications in industrial biotechnology.Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 BrazilEngenharia de Bioprocessos e Biotecnologia - TCCUniversidade de Sorocaba - TCCMonografia / TCCEngenharias::Engenharia Biomédica