Sistema nanocarreador funcionalizado com ulvana para liberação alvo-específico

INTRODUÇÃO: A ulvana é um polissacarídeo sulfatado extraído de algas marinhas verdes, reconhecido pelas funções estrutural, lubrificante, antioxidante e anti-inflamatória. A ulvana é constituída por unidades dissacarídicas de ácido glucorônico unido a ramnose 3-sulfato por ligações do tipo α 1→4, formando um biopolímero de elevada massa molar. O padrão molecular repetitivo de sua estrutura origina epítopos funcionais que podem ser utilizados como alvos específicos para a ligação com receptores CD44 em tecidos epiteliais inflamados e células tumorais. OBJETIVO: Preparar e caracterizar nanoestruturas híbridas na forma lipossomal, funcionalizadas com ulvana, com e sem DATK32-PE. MÉTODOS: A ulvana foi extraída da Ulva ohnoi e caracterizada por técnicas físico-químicas. Os lipossomas catiônicos (LCs) vazios, os LCs incorporados com o anticorpo monoclonal DATK32- PE, os LCs funcionalizados com ulvana e os LCs incorporados com DATK32-PE e funcionalizados com ulvana foram preparados e, em seguida, caracterizados por técnicas físicas e físico-químicas: calorimetria exploratória diferencial (DSC), espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), espalhamento dinâmico de luz (DLS), espalhamento de luz por análise de fase (PALS), avaliação da estabilidade, criomicroscopia eletrônica de transmissão (CRYO-EM), microscopia confocal de varredura a laser (LSCM), espectrometria de fluorescência e estudos de citotoxicidade. RESULTADOS: Os LCs vazios e os LCs incorporados com DATK32- PE apresentam diâmetro hidrodinâmico (DH) ≈ 70 nm, índice de polidispersidade (IPD) ≈ 0,100 e potencial zeta (PZ) > +30 mV, enquanto, os LCs funcionalizados comulvana e LCs incorporados com DATK32-PE e funcionalizados com ulvana apresentam DH < 200 nm, IPD < 0,300 e PZ próximo de +30 mV. Todos os lipossomaspreparados são mais estáveis quando armazenados sob refrigeração (4 – 8 °C). A adição do DATK32- PE e da ulvana não alterou o comportamento térmico dos LCs. Osresultados de FTIR mostraram as modificações no espectro ocasionadas pela ligaçãoentre a ulvana e o 1,2-dioleoil-3-trimetilamônio-propano (DOTAP) presente nos LCs. A CRYO-EM mostrou as características da superfície dos lipossomas, e o surgimento de rugosidades e a modificação do formato dos LCs após a incorporação do DATK32-PE e a funcionalização com a ulvana. A eficiência de encapsulação do DATK32-PE nos LCs incorporados com DATK32-PE foi igual a 41,8 ± 4,9%. Nos estudos de citotoxicidade, as células cancerígenas de fibroblasto humano tratadas com os LCs funcionalizados com ulvana e os LCs incorporados com DATK32-PE e funcionalizados com ulvana apresentaram viabilidade celular de 60,4 ± 5,6 % e 57,6 ± 7,0%, respectivamente. CONCLUSÃO: A análise dos resultados mostrou que as metodologias utilizadas foram eficientes para a preparação das formulações lipossômicas. As técnicas utilizadas na caracterização dos lipossomas comprovaram que os LCs incorporados com DATK32-PE e funcionalizados com ulvana têm potencial aplicação como sistemas de liberação de DATK32-PE na mucosa intestinal inflamada, uma vez que apresentaram estabilidade em temperatura fisiológica (37 °C) durante o tempo necessário para que os lipossomas alcancem a mucosa intestinal (menos de 24 h). Os estudos de citotoxicidade indicaram a necessidade de utilizar concentrações maiores das formulações lipossômicas em estudos futuros, com o intuito de aumentar a citotoxicidade celular contra linhagens celulares cancerígenas.