Desenvolvimento de enzimas dessaturases de ácido graxo em pichia pastoris

Os ácidos graxos polinsaturados linoleico (omega-6) e α-linolenico (omega-3) são essenciais para numerosas funções celulares, desempenhando papeis importantes como componentes estruturais de membrana, e atuando como precursores na sintese de ácidos graxos polinsaturados de cadeia longa como os ácidos araquidonico (AA), eicosapentaenoico (EPA) e docosahexaenoico (DHA). A biossintese destes ácidos graxos poli-insaturados envolve processos que alternam dessaturação e elongação catalisados por uma série de enzimas. Enzimas omega-3 dessaturase desempenham um papel importante na conversao de acidos graxos omega-6 em ácidos graxos omega-3. Neste trabalho nos reportamos a selecao in silico de seis enzimas dessaturases de acidos graxos que segundo estudos, possuem a capacidade de converter o Acido Graxo omega-6 em omega-3. Após a seleção, foi realizada a clonagem, expressao heterologa em levedura Pichia pastoris e ensaios enzimaticos utilizando as linhagens recombinantes em matriz lipidica. Para a seleção dos genes foram aplicadas buscas nas bases de dados para detecção de sequencias genicas que apresentem os domínios de FAD (Fatty Acid Desaturase). A clonagem dos genes foi realizada por Ensaio de Gibson no vetor pPink_HC e a expressão das proteinas foi realizada na levedura Pichiapink Cepa 2. Neste trabalho foi possível produzir dessaturases recombinantes como componente de membrana celular. De acordo com as análises in vitro e in vivo de Acidos Graxos, e possivel inferir que os genes recombinantes derivados das linhagens de P. hirtus, P. pastoris e R. kratochvilovae foram capazes de atingir o objetivo do projeto de dessaturar o substrato C18:2 (omega-6) convertendo seu conteudo em C18:3 (omega-3). Prospectar e estudar genes que possam ser associados as mudanças de perfil de ácidos graxos em microrganismos contribui para melhor entendimento de suas estruturas, funções e evolução. Este trabalho foi capaz de prover uma base para futuros estudos que visem aplicação de engenharia metabolica microbiana para conversão ou produção de ácidos graxos poli-insaturados específicos.