Prospecção em bancos de dados públicos, clonagem e produção de proteínas anfipáticas recombinantes em Aspergillus oryzae

As proteínas anfipáticas produzidas por fungos filamentosos, possuem amplo potencial biotecnológico devido à sua capacidade de interação com superfícies hidrofóbicas. Este estudo teve como objetivo produzir hidrofobinas e proteínas de ligação à superfície hidrofóbica recombinantes homólogas em Aspergillus oryzae, utilizando abordagens integradas de bioinformática, clonagem molecular e edição genômica via CRISPR-Cas9. Foram prospectadas sequências de hidrofobinas em bancos de dados públicos (UniProt, Pfam, InterPro) e desenvolvidas ferramentas computacionais (SSN, CPHunter) para identificar padrões estruturais, como cysteine loops. Quatro candidatas foram selecionadas: RoIA, H2, H3 (classe I) e TUB (potencial classe III). As sequências foram amplificadas por PCR, clonadas em E. coli e integradas no genoma de A. oryzae, utilizando um cassete de expressão com promotor pglaA e sistema de seleção uidA/ pyrGΔ. A expressão das proteínas foi confirmada por SDS-PAGE, com secreção eficiente de RoIA (16 kDa) e TUB (20 kDa). A ferramenta CPHunter demonstrou alta acurácia na identificação de hidrofobinas, revelando novas candidatas estruturais para projetos futuros. Os resultados destacam a viabilidade de A. oryzae como biofábrica para produção de hidrofobinas, com aplicações em biotecnologia industrial.